CRM1 Geninin Baş Boyun Kanseri ve Metastazındaki Rollerinin Araştırılması
[ X ]
Tarih
2016
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Birçok teknolojik gelişmelere rağmen baş boyun kanserlerinin sürvisinde önemli bir değişiklik olmamış ve insan hayatı için büyük bir tehdit oluşturmaya devam etmektedir. Baş boyun kanserlerinde başlıca tedavi yöntemi cerrahi uygulamalar olup, yüz, ağız ve laringofarinks gibi organlarda ciddi şekil bozukluklarına neden olmaktadır. Dolayısıyla bu uygulamalar hastaların yutma, konuşma gibi fonksiyonlarını da etkilemekte ve yaşam kalitesini düşürmektedir. Ayrıca kemoterapi gibi güncel tedavi yaklaşımları da toksisite gibi önemli yan etkilere sahiptir. Diğer yandan bu tedavilerin etkinliğini sorgulayan yüksek nüks ve metastaz oranları, alternatif tedavi yöntemlerine ihtiyaç olduğunu göstermektedir. Birçok açıdan baş boyun kanserleri hastada psikolojik, ekonomik ve sosyal sorunlara neden olmaktadır. Son 20-30 yıldaki insan genom teknolojisindeki ilerleme ve gelişmeler, yeni tanı, tedavi ve daha etkin koruyucu yöntemlerin gelişmesine olanak sağlamaktadır. Çoğu kanserde olduğu gibi, baş ve boyun kanseri de temel olarak genetik bağlantılı bir hastalıktır. Çeşitli genlerin kümülatif değişiklikleri baş boyun kanserinin gelişiminden sorumludur. Baş ve boyun kanserinde rol alan çeşitli genlerin tespit edilmesi, bu genlerin kanser patogenezindeki etkilerinin bilinmesi ve kanser tedavisinde kullanılabilmeleri ciddi önem arz etmektedir. Bu çalışmada da çeşitli kanser türlerinde aktif rolü olduğu kanıtlanan, tümör büyümesinde ve metastazında etkileri ortaya konulmuş, kritik bir gen olan CRM1?in baş boyun kanseri üzerine etkileri araştırılmıştır. Çalışmamız kapsamında, baş boyun kanserine ait UT-SCC-74A ve metastazı UT-SCC-74B hücre hatları kullanılmıştır. Hücreler üzerinde CRM1 geninin ekspresyonu immunofloresan boyama ile gösterilmiştir. Kültüre edilen hücrelerin transfeksiyon etkinliği GAPDH-siRNA ile belirlenmiş ve ardından hücrelere CRM1-siRNA transfekte edilerek CRM1 geni baskılanmıştır. Baskılanma düzeyleri kantitatif real time PCR ve western blot analizleriyle gösterilmiştir. CRM1 geninin baş boyun kanseri hücre hatları üzerinde proliferasyona olan etkileri xCELLigence gerçek zamanlı hücre analiz sistemi ile araştırılmıştır. Aynı zamanda proliferasyon analizlerinin validasyonu için XTT testi ve in vitro scratch assay testi yapılmıştır. Çalışmamız sonucunda UT-SCC-74A ve UT-SCC-74B hücre hatlarında CRM1 geni ekspresyonu gösterilmiştir. Hücrelerde CRM1 ekspresyonu CRM1-siRNA kullanılarak anlamlı şekilde baskılanmıştır. Optimal baskılama şartlarında gerçekleştirilen proliferasyon ve migrasyon analiz sonuçlarına göre hem UT-SCC-74A hem de UT-SCC-74B hücrelerinde CRM1 ekspresyonunun baskılanması kanser hücrelerinin büyümesini ve göç kabiliyetini de anlamlı şekilde azaltmıştır. CRM1 ekpsresyonu baskılandığında hücrelerde kaspaz 3 aktivite ölçüm sonuçlarına göre de her iki hücre grubunda da CRM1-siRNA ve kontrol grupları arasında anlamlı bir fark oluşmamıştır. Sonuç olarak; çalışmamız kapsamında CRM1 geninin baş boyun kanser ve metastazlı hücreleri üzerindeki etkileri ortaya konulmuştur. Bu fonksiyonel çalışma ile CRM1 geninin baş boyun kanserlerindeki temel moleküler rolleri belirlenmiş ve bundan sonraki aşamada mevcut agresif tedavilere alternatif olarak CRM1 geni ileyeni moleküler tedavi yöntemlerine temel oluşturulmuştur.
Açıklama
01.09.2016
Anahtar Kelimeler
Metastaz, siRNA, İnhibitör, Baş boyun kanseri, CRM1, Nükleer Eksport
